【UCSB】无法过柱机，如何手动过反相柱？

我们通常懂的柱层析一般是上当互为柱层析【 柱层析技术详解 】，柱子的轻质是薄膜。薄膜表面但会有很多-SiOH烷基，因此对于大亲出水性的化合物的附着能够较强，柱层析除去时，薄膜对小亲出水性的化合物附着能够极强，所以先以被除去拔下来。对于一些亲出水性超大的化合物，薄膜的附着能够太强以至于用常用的盐酸未能除去拔下来，未能用正互为柱层析同步进行纯化。

这种情况下就要考虑同步进行反美互为柱层析，反美互为柱层析最常用的轻质是C18反美互为薄膜轻质，这类反美互为薄膜是透过C18烷基硅烷将薄膜的 -SiOH烷基封住，形成了很多C18键合微孔，对于小亲出水性的化合物附着能强，同样美对大亲出水性的化合物的附着能够较弱，因此和正互为薄膜的除去顺序同样美，因此称为反美互为薄膜。

我们在同步进行反美互为柱层析时，分量除去开始以大比例亲出水性乙醇开始， 由于C18反美互为薄膜轻质表面但会异质性，异质支链就但会暴发蜷缩，因此使用前必须用亲出水性乙醇增殖（异质支链再次庄重），再继续成形出水盐酸（维持其附着活性）。增殖平衡的方式里头面必不可少，否则但会明显影响受控效率。

【反美互为Flash柱层析可以干法上样吗？ 】

实验室里头面我们通常使用过柱机同步进行反美互为柱层析，但是如果不会过柱机，可以像正互为一样手动柱层析吗？当然是可以的。不同之处就是C18轻质有点良，必须重复透过，别像都可薄膜一样过完直接碰到了。下面小编透过一下加利福尼亚大学圣塔芭芭拉两所的C18反美互为柱层析标准操作。

这两个化合物，内含羧基，酚氨基等大亲出水性烷基，都可正互为柱层析很难受控。反美互为TLC监测发现分的很开，简便反美互为柱层析。柱层析单单和正互为柱层析大同小异。基本细节回看往期篇名【 柱层析技术详解 】。

一、首先以在柱子地下上铺一层1cm粗的石英砂。

二、装满C18反美互为薄膜，甲醛润柱，增殖薄膜，此方式里头面必不可少。

三、完全滴薄膜后，中下层拔少量甲醛，耳边击打，使轻质中下层越来越平整。

四、平整后，将甲醛液面压到薄膜上沿，中下层投身2cm粗的石头（貌似圣巴巴拉半岛海滩上的石头）。

五、用过柱经济体制的出水互为置换柱子里头的盐酸，准备上样。

一般情况下，湿法上样就可以了，最出色用出水互为经济体制酸性解样品同步进行上样，如果酸性解度变差，可以投身少量的有机互为促酸性。上样后，投身展开剂分量除去，投身盐酸时不用将中下层的石头冲散。 注意事项：由于反美互为柱的压力比都可的正互为柱大很多，整个单单要在空气流通橱里头面同步进行，并且加压时将空气流通橱拉低，安全性第一。分量除去过程里头面，可以透过正互为TLC监测反美应，如果爬不起来可以想法一下EA:AcOH=200:1经济体制。

六、柱层析结束后，透过甲醛洗手柱子，下次备用。

常用的出水互为经济体制：0.1%TFA乙醇，0.1%碳酸氢铵乙醇。

有机互为经济体制：乙腈，甲醛。

参考资料

C18 Reversed-Phase Silica Gel Flash Chromatography – A Visual Walkthrough；Jeffrey J. Jackson, Zakarian Group. UC Santa Barbara.